中国药物警戒 ›› 2013, Vol. 10 ›› Issue (11): 643-646.

• 基础及临床研究 • 上一篇    下一篇

正交优化乙醛脱氢酶2基因多态性PCR体系

吴珂,蔡泓敏,刘震,赵冠人,冯端浩   

  1. 解放军第309医院药剂科,北京 100091
  • 收稿日期:2012-09-10 修回日期:2016-03-09 出版日期:2013-11-08 发布日期:2016-03-09
  • 作者简介:吴珂,女,本科,主管药师,临床药学。

Optimization for PCR System of ALDH2 Polymorphism Using Orthogonal Design

WU Ke ,CAI Hong-min ,LIU Zhen ,ZHAO Guan-ren, FENG Duan-hao   

  1. Department of Pharmacy, 309th Hospital of PLA, Beijing 100091, China
  • Received:2012-09-10 Revised:2016-03-09 Online:2013-11-08 Published:2016-03-09

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摘要： 目的 建立通用的ALDH2 基因PCR 反应体系,筛选出各反应因素的最佳水平。方法采用正交设计L16（45）在4 个水平5 个因素（Taq 酶、引物、Mg2+、dNTP 和模板DNA）对ALDH2 基因PCR 反应体系进行实验,两次结果分别用统计软件MINITAB 进行分析,利用梯度PCR 确定引物最佳退火温度。结果 ALDH2 基因PCR 反应的最佳反应条件为：为25 L 体系中包含：Mg2+（25 mM）2.5 L、dNTPs（2.5 mM）2.0 L、引物上游和引物下游各（2.5 M）3.0 L、模板DNA 3.0μL、10×PCR buffer 2.5 L、Taq 酶1.5U,退火温度为60℃。结论 这一通用PCR 反应条件的建立为实现ALDH2 基因多态性检测建立了基础。

关键词: ALDH2, 基因多态性, 正交设计, PCR体系

Abstract: Objective To develop the most suitable PCR system for ALDH2. Methods The orthogonal design was used to optimize PCR reaction system for ALDH2 with five factors(Taq DNA polymerase, Mg2+, DNA template, dNTPs and primers) at four levels respectively. Results The most suitable PCR system for ALDH2 was established, namely 25 L reaction system containing 2.5 L Mg2+(25mM), 2.0 L dNTPs mix(2.5mM), 3.0 L primers(2.5mM), 3.0 L DNA (~30ng), 2.5 μL of 10×PCR buffer, 1.5U of Taq DNA polymerase. The optimal annealing temperature was 60 based on gradient PCR. Conclusion This universal system provideda standardizing program for the ALDH2 gene polymorphism.

Key words: ALDH2, gene polymorphism, orthogonal design, PCR reaction system

中图分类号: